中國(guó)獸藥研究與應(yīng)用全書：獸用診斷試劑及應(yīng)用

第1章緒論1
1.1我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀2
1.1.1養(yǎng)豬業(yè)2
1.1.2養(yǎng)禽業(yè)3
1.1.3牛羊養(yǎng)殖業(yè)4
1.2我國(guó)動(dòng)物疫病流行現(xiàn)狀及防控策略5
1.2.1主要?jiǎng)游镆卟×餍鞋F(xiàn)狀5
1.2.2我國(guó)動(dòng)物疫病防控策略10
1.3獸用診斷試劑的發(fā)展歷程19
1.3.1獸用診斷試劑的發(fā)展史19
1.3.2我國(guó)獸用診斷試劑的行業(yè)現(xiàn)狀20
1.3.3我國(guó)獸用診斷試劑的發(fā)展趨勢(shì)22
主要參考文獻(xiàn)23
第2章獸用診斷試劑生物活性原料的研制24
2.1抗原25
2.1.1抗原的定義與分類25
2.1.2天然抗原的研制27
2.1.3重組抗原的研制28
2.1.4合成多肽抗原的研制34
2.2抗體37
2.2.1抗體的定義與分類37
2.2.2多克隆抗體的研制38
2.2.3單克隆抗體的研制40
2.2.4基因工程抗體的研制43
2.3工具酶45
2.3.1工具酶的定義與分類45
2.3.2從天然材料中提取酶47
2.3.3基因工程制備酶49
2.4生物活性原料的純化55
2.4.1生物活性原料的預(yù)處理55
2.4.2生物活性原料的初純56
2.4.3生物活性原料的精純59
2.4.4應(yīng)用62
2.5生物活性原料的保存與質(zhì)量控制63
2.5.1生物活性原料的保存63
2.5.2生物活性原料的質(zhì)量控制64
主要參考文獻(xiàn)66
第3章獸用ELISA類試劑的研制68
3.1概述69
3.2ELISA的基本原理和反應(yīng)模式69
3.2.1直接ELISA70
3.2.2間接ELISA71
3.2.3競(jìng)爭(zhēng)ELISA72
3.2.4夾心ELISA78
3.3酶標(biāo)記物的制備81
3.3.1ELISA中常用酶及其底物系統(tǒng)81
3.3.2酶標(biāo)記方法85
3.3.3酶標(biāo)記物的純化與保存89
3.3.4酶標(biāo)記物的質(zhì)量評(píng)價(jià)91
3.3.5新型酶的研究進(jìn)展92
3.4ELISA試劑盒的組成93
3.4.1固相系統(tǒng)93
3.4.2酶標(biāo)系統(tǒng)96
3.4.3樣品系統(tǒng)97
3.4.4洗滌系統(tǒng)97
3.4.5對(duì)照系統(tǒng)98
3.4.6顯色系統(tǒng)99
3.5ELISA類試劑研制的基本原則100
3.5.1反應(yīng)載體的選擇100
3.5.2緩沖體系的作用及常用緩沖體系100
3.5.3添加劑的作用及常用添加劑103
3.5.4生物活性原料的選擇105
3.5.5反應(yīng)條件的優(yōu)化106
3.6ELISA類試劑研發(fā)的關(guān)鍵點(diǎn)107
3.6.1靶標(biāo)類型及方法選擇108
3.6.2質(zhì)控品的建立109
3.6.3判界確定112
3.6.4性能評(píng)估115
3.7ELISA檢測(cè)中的常見(jiàn)問(wèn)題118
3.7.1樣品收集118
3.7.2實(shí)驗(yàn)環(huán)境和儀器119
3.7.3試劑使用和保管120
3.7.4加樣品及反應(yīng)試劑120
3.7.5溫育120
3.7.6洗板121
3.7.7顯色121
3.7.8讀值121
3.7.9結(jié)果判定122
3.7.10常見(jiàn)問(wèn)題及分析122
3.8ELISA技術(shù)展望123
3.8.1高靈敏度檢測(cè)123
3.8.2高通量檢測(cè)125
3.8.3自動(dòng)化檢測(cè)125
主要參考文獻(xiàn)125
第4章獸用化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)的研制127
4.1概述128
4.2化學(xué)發(fā)光免疫分析的原理及應(yīng)用128
4.2.1化學(xué)發(fā)光原理128
4.2.2化學(xué)發(fā)光技術(shù)在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用129
4.3化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)組成135
4.3.1全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)135
4.3.2化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)142
4.4獸用化學(xué)發(fā)光免疫反應(yīng)試劑144
4.4.1化學(xué)發(fā)光技術(shù)在獸用檢測(cè)領(lǐng)域的優(yōu)勢(shì)145
4.4.2獸用化學(xué)發(fā)光免疫診斷試劑研制流程148
4.4.3應(yīng)用實(shí)例——非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)方法（化學(xué)發(fā)光法）151
4.5化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)研發(fā)的關(guān)鍵點(diǎn)155
4.5.1化學(xué)發(fā)光技術(shù)中的包被工藝155
4.5.2化學(xué)發(fā)光技術(shù)中的標(biāo)記工藝157
4.5.3系統(tǒng)整合技術(shù)159
主要參考文獻(xiàn)161
第5章獸用免疫色譜類試劑的研制162
5.1概述163
5.2免疫色譜試紙的結(jié)構(gòu)165
5.2.1樣品墊165
5.2.2結(jié)合墊166
5.2.3色譜膜166
5.2.4吸收墊167
5.3免疫色譜試紙的檢測(cè)原理167
5.3.1直接法168
5.3.2間接法168
5.3.3競(jìng)爭(zhēng)法169
5.4LFIA標(biāo)記物169
5.4.1金納米顆粒170
5.4.2熒光素172
5.4.3磁納米顆粒175
5.4.4上轉(zhuǎn)換納米顆粒177
5.4.5其他標(biāo)記材料180
5.5免疫色譜試劑研制的基本原則181
5.5.1樣品和檢測(cè)靶標(biāo)的類型181
5.5.2免疫色譜試紙的檢測(cè)模式182
5.5.3試紙?jiān)虾Y選與確定188
5.5.4生物活性原料的篩選與條件優(yōu)化192
5.5.5緩沖體系的作用及常用緩沖體系194
5.5.6添加劑的作用及常用添加劑197
5.5.7試紙反應(yīng)條件的優(yōu)化197
5.6免疫色譜試劑研制的關(guān)鍵點(diǎn)199
5.6.1生物活性原料及其標(biāo)記技術(shù)199
5.6.2蛋白印跡工藝203
5.6.3樣品墊處理206
5.6.4結(jié)合墊處理207
5.6.5反應(yīng)系統(tǒng)的建立及優(yōu)化207
5.6.6試紙貯存208
5.7免疫色譜檢測(cè)的常見(jiàn)問(wèn)題209
5.7.1納米顆粒標(biāo)記物常見(jiàn)問(wèn)題及原因209
5.7.2假信號(hào)產(chǎn)生的原因210
5.7.3攔截線常見(jiàn)問(wèn)題及原因211
5.7.4檢測(cè)靈敏度問(wèn)題211
5.8免疫色譜技術(shù)展望212
5.8.1高靈敏度檢測(cè)212
5.8.2高通量檢測(cè)216
5.8.3數(shù)字化檢測(cè)217
主要參考文獻(xiàn)218
第6章獸用PCR類試劑的研制221
6.1概述222
6.2PCR檢測(cè)技術(shù)的原理與分類224
6.2.1PCR的原理及基本概念225
6.2.2幾種常見(jiàn)PCR的原理與應(yīng)用229
6.2.3熒光PCR的原理及基本概念234
6.2.4幾種常見(jiàn)熒光PCR的原理及應(yīng)用236
6.3PCR試劑研發(fā)的基本原則245
6.3.1靶基因的選擇246
6.3.2引物的設(shè)計(jì)247
6.3.3探針類型和設(shè)計(jì)原則250
6.3.4引物探針的網(wǎng)絡(luò)驗(yàn)證255
6.3.5熒光PCR的試驗(yàn)誤差256
6.3.6內(nèi)標(biāo)類型及設(shè)置原則260
6.4PCR試劑研發(fā)的關(guān)鍵點(diǎn)262
6.4.1樣品采集、處理及核酸提取262
6.4.2對(duì)照品和樣品盤的制備及應(yīng)用266
6.4.3絕對(duì)定量方法269
6.4.4相對(duì)定量方法273
6.4.5熒光RT-PCR反應(yīng)體系279
6.5PCR試驗(yàn)常見(jiàn)的問(wèn)題289
6.6PCR技術(shù)展望290
主要參考文獻(xiàn)292
第7章其他常見(jiàn)獸用診斷技術(shù)297
7.1凝集試驗(yàn)298
7.1.1發(fā)展歷史298
7.1.2反應(yīng)原理和分類298
7.1.3操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)300
7.1.4主要技術(shù)特點(diǎn)304
7.2沉淀試驗(yàn)305
7.2.1發(fā)展歷史305
7.2.2反應(yīng)原理和分類306
7.2.3操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)309
7.2.4主要技術(shù)特點(diǎn)314
7.3補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)315
7.3.1發(fā)展歷史315
7.3.2反應(yīng)原理和分類315
7.3.3操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)317
7.3.4主要技術(shù)特點(diǎn)325
7.4中和試驗(yàn)326
7.4.1發(fā)展歷史327
7.4.2反應(yīng)原理和分類328
7.4.3操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)329
7.4.4主要技術(shù)特點(diǎn)332
7.5血凝和血凝抑制試驗(yàn)332
7.5.1發(fā)展歷史333
7.5.2反應(yīng)原理和分類333
7.5.3操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)334
7.5.4主要技術(shù)特點(diǎn)339
7.6間接免疫熒光試驗(yàn)339
7.6.1發(fā)展歷史340
7.6.2反應(yīng)原理340
7.6.3操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)340
7.6.4主要技術(shù)特點(diǎn)342
7.7核酸雜交技術(shù)342
7.7.1發(fā)展歷史343
7.7.2反應(yīng)原理和分類344
7.7.3操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)347
7.7.4主要技術(shù)特點(diǎn)350
7.8核酸片段多態(tài)性分析350
7.8.1發(fā)展歷史350
7.8.2反應(yīng)原理和分類351
7.8.3操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)358
7.8.4主要技術(shù)特點(diǎn)363
主要參考文獻(xiàn)366
第8章新型獸用診斷技術(shù)369
8.1蛋白芯片技術(shù)370
8.1.1定義和分類370
8.1.2技術(shù)特點(diǎn)與應(yīng)用現(xiàn)狀372
8.1.3產(chǎn)業(yè)化難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)377
8.1.4發(fā)展趨勢(shì)378
8.2基因芯片技術(shù)380
8.2.1定義和分類380
8.2.2技術(shù)特點(diǎn)與應(yīng)用現(xiàn)狀380
8.2.3產(chǎn)業(yè)化難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)387
8.2.4發(fā)展趨勢(shì)389
8.3微流控技術(shù)389
8.3.1定義和分類390
8.3.2技術(shù)特點(diǎn)與應(yīng)用現(xiàn)狀391
8.3.3產(chǎn)業(yè)化難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)397
8.3.4發(fā)展趨勢(shì)397
8.4量子點(diǎn)技術(shù)398
8.4.1定義和分類398
8.4.2量子點(diǎn)的合成和原理400
8.4.3技術(shù)特點(diǎn)與應(yīng)用現(xiàn)狀403
8.4.4產(chǎn)業(yè)化難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)405
8.4.5發(fā)展趨勢(shì)410
8.5核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)410
8.5.1定義和分類410
8.5.2技術(shù)特點(diǎn)與應(yīng)用現(xiàn)狀414
8.5.3產(chǎn)業(yè)化難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)416
8.5.4發(fā)展趨勢(shì)417
8.6數(shù)字PCR技術(shù)418
8.6.1定義和分類418
8.6.2技術(shù)特點(diǎn)與應(yīng)用現(xiàn)狀422
8.6.3產(chǎn)業(yè)化難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)426
8.6.4發(fā)展趨勢(shì)427
8.7核酸適配體技術(shù)428
8.7.1定義和分類428
8.7.2技術(shù)特點(diǎn)與應(yīng)用現(xiàn)狀430
8.7.3產(chǎn)業(yè)化難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)436
8.7.4發(fā)展趨勢(shì)437
主要參考文獻(xiàn)439
第9章獸用診斷技術(shù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)442
9.1國(guó)際獸醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)概況443
9.1.1世界動(dòng)物衛(wèi)生組織的發(fā)展歷史444
9.1.2國(guó)際動(dòng)物疫病診斷標(biāo)準(zhǔn)體系445
9.2動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室診斷國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)447
9.2.1多種動(dòng)物易感染疫病447
9.2.2豬病458
9.2.3禽類動(dòng)物疫病463
9.2.4反芻動(dòng)物疫病472
9.2.5馬病、兔病和其他疫病480
9.2.6抗微生物藥物耐藥性檢測(cè)類國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)481
主要參考文獻(xiàn)484
第10章獸用診斷技術(shù)國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)485
10.1我國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)概況486
10.1.1我國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展歷史486
10.1.2動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)體系486
10.1.3動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的作用487
10.2獸用診斷類國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)488
10.2.1多種動(dòng)物共患病488
10.2.2豬病492
10.2.3禽病502
10.2.4反芻動(dòng)物疫病508
10.2.5馬病516
10.2.6犬貓等寵物病519
10.2.7兔病——兔出血癥521
10.3獸用診斷/檢疫/檢測(cè)類行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)521
10.3.1多種動(dòng)物共患病521
10.3.2豬病526
10.3.3禽病532
10.3.4反芻動(dòng)物疫病543
10.3.5馬病551
10.3.6兔病555
10.4獸用診斷技術(shù)國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)展望556
10.4.1補(bǔ)充完善動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)體系557
10.4.2繼續(xù)提升獸醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量557
10.4.3嚴(yán)格認(rèn)真執(zhí)行動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)557
10.4.4積極開(kāi)展國(guó)際交流與合作558
主要參考文獻(xiàn)558
第11章獸用診斷試劑的注冊(cè)560
11.1獸醫(yī)診斷制品注冊(cè)相關(guān)管理法規(guī)561
11.1.1《獸藥管理?xiàng)l例》561
11.1.2《獸藥注冊(cè)辦法》571
11.1.3《獸醫(yī)診斷制品注冊(cè)分類及注冊(cè)資料要求》575
11.2獸醫(yī)診斷制品的注冊(cè)評(píng)審程序及要點(diǎn)578
11.2.1獸藥注冊(cè)評(píng)審工作程序（參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第392號(hào)）578
11.2.2申請(qǐng)人注意事項(xiàng)580
11.2.3注冊(cè)評(píng)審注意要點(diǎn)583
第12章獸用診斷試劑的生產(chǎn)585
12.1獸用診斷試劑生產(chǎn)廠房與設(shè)施586
12.1.1廠房和設(shè)施的規(guī)劃586
12.1.2環(huán)境影響評(píng)估588
12.1.3廠房和設(shè)施的技術(shù)要求591
12.1.4GMP對(duì)廠房設(shè)施的要求602
12.2生產(chǎn)許可證的申請(qǐng)606
12.2.1從事獸藥生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備的條件606
12.2.2獸藥生產(chǎn)許可證的管理607
12.2.3審批程序607
12.2.4收回與注銷608
12.3獸用診斷試劑的規(guī)模化生產(chǎn)608
12.3.1規(guī)?；a(chǎn)的一般流程610
12.3.2原輔材料質(zhì)量檢驗(yàn)621
12.3.3生產(chǎn)指令與標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程629
12.3.4中試生產(chǎn)與規(guī)模化生產(chǎn)632
12.3.5生產(chǎn)過(guò)程控制/半成品質(zhì)量控制635
12.3.6中間品/成品質(zhì)量檢驗(yàn)653
主要參考文獻(xiàn)663
第13章獸用診斷試劑的質(zhì)量控制664
13.1獸醫(yī)檢測(cè)方法的驗(yàn)證原則和方法665
13.1.1檢測(cè)方法建立流程665
13.1.2檢測(cè)方法確認(rèn)流程667
13.2不同種類獸用診斷試劑的質(zhì)量控制673
13.2.1酶聯(lián)免疫診斷試劑的質(zhì)量控制673
13.2.2免疫色譜類試劑的質(zhì)量控制676
13.2.3核酸擴(kuò)增類試劑的質(zhì)量控制678
13.3獸用診斷試劑用質(zhì)量控制物的技術(shù)要求680
13.3.1國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)680
13.3.2獸藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)683
13.3.3體外診斷試劑用質(zhì)控物686
13.3.4獸醫(yī)檢測(cè)用核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制689
主要參考文獻(xiàn)695
第14章獸用診斷試劑的應(yīng)用696
14.1在外來(lái)動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)和預(yù)防中的應(yīng)用697
14.1.1進(jìn)境動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品檢疫698
14.1.2高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)外來(lái)動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)預(yù)警698
14.2在新發(fā)突發(fā)動(dòng)物疫病暴發(fā)流行中的應(yīng)用699
14.2.1新發(fā)突發(fā)動(dòng)物疫病確診和疫情確認(rèn)700
14.2.2暴發(fā)調(diào)查及緊急監(jiān)測(cè)702
14.2.3疫情解除封鎖和恢復(fù)生產(chǎn)確認(rèn)704
14.3在本土動(dòng)物疫病穩(wěn)定控制中的應(yīng)用705
14.3.1常發(fā)動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)（主動(dòng)監(jiān)測(cè)）705
14.3.2變異病原的監(jiān)測(cè)預(yù)警707
14.3.3常發(fā)動(dòng)物疫病診斷（被動(dòng)監(jiān)測(cè)）709
14.3.4免疫效果評(píng)價(jià)710
14.3.5動(dòng)物檢疫監(jiān)督711
14.3.6獸用投入品攜帶病原的監(jiān)管713
14.4在動(dòng)物疫病凈化和消滅中的應(yīng)用713
14.4.1養(yǎng)殖場(chǎng)疫病凈化和效果評(píng)估713
14.4.2區(qū)域凈化和無(wú)疫認(rèn)證718
14.5在動(dòng)物疫苗研發(fā)與檢驗(yàn)中的應(yīng)用718
14.5.1動(dòng)物疫苗用菌、毒、蟲(chóng)種鑒定719
14.5.2動(dòng)物生產(chǎn)用細(xì)胞的純凈性檢測(cè)720
14.5.3動(dòng)物疫苗生產(chǎn)用原輔材料的質(zhì)量控制720
14.5.4動(dòng)物疫苗半成品或成品有效成分的定量721
14.5.5動(dòng)物疫苗成品的效力檢驗(yàn)721
14.5.6動(dòng)物疫苗研發(fā)或檢驗(yàn)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量控制724
14.6獸用診斷試劑的應(yīng)用策略725
14.6.1試劑敏感性和特異性的選擇策略726
14.6.2多種類診斷試劑的聯(lián)合應(yīng)用策略730
14.6.3兼顧科學(xué)性和可行性732
14.6.4試劑使用前的充分驗(yàn)證和使用中的質(zhì)量控制733
14.7獸用診斷試劑的應(yīng)用展望733
主要參考文獻(xiàn)734