基因工程：動物細胞制藥關鍵技術

第一章  動物細胞培養(yǎng)      001
第一節(jié)  動物細胞培養(yǎng)基礎知識    002
一、基本概念    002
二、動物細胞培養(yǎng)條件    003
三、動物細胞培養(yǎng)實驗室    004
四、無菌技術    006
第二節(jié)  動物細胞培養(yǎng)技術    007
一、動物細胞凍存與復蘇    007
二、動物細胞傳代    009
三、動物細胞懸浮馴化及無血清培養(yǎng)    011
四、動物細胞分批培養(yǎng)    015
五、動物細胞補料分批培養(yǎng)    016
六、動物細胞灌流技術培養(yǎng)    022
第三節(jié)  動物細胞生物特性分析    025
一、動物細胞生長曲線和倍增時間分析    025
二、動物細胞增殖測定    028
三、動物細胞凋亡檢測    031
四、動物細胞周期檢測    036
參考文獻    038
第二章  動物細胞載體    041
第一節(jié)  質粒載體構建    042
一、目的基因獲取    042
二、限制性內切酶酶切    046
三、目的片段和載體連接    048
四、重組子轉化    050
五、重組載體篩選    052
六、重組載體鑒定    052
第二節(jié)  病毒載體構建    056
一、桿狀病毒表達載體    056
二、慢病毒載體    057
三、腺病毒載體    059
四、逆轉錄病毒載體    060
參考文獻    061
第三章  目的基因導入    065
第一節(jié)  動物細胞轉染    066
一、脂質體轉染    066
二、聚乙烯亞胺轉染    067
三、電穿孔轉染    068
四、影響細胞轉染的因素    069
第二節(jié)  細胞轉染效率檢測    070
一、流式細胞儀檢測    071
二、熒光顯微鏡檢測    071
參考文獻    072
第四章  重組穩(wěn)定細胞株篩選和評估    075
第一節(jié)  重組穩(wěn)定細胞池篩選    076
一、常用的抗生素篩選標記    076
二、遺傳霉素篩選    078
三、DHFR篩選    079
四、GS篩選    080
第二節(jié)  重組單克隆細胞株分離    081
一、有限稀釋法    081
二、流式細胞熒光分選技術    082
三、ClonePix    083
四、克隆環(huán)法    084
五、其他篩選方法    085
第三節(jié)  重組穩(wěn)定細胞系評估    086
一、細胞污染檢測    086
二、細胞系鑒定    087
三、外源基因整合分析    089
四、重組蛋白表達分析    098
參考文獻    101
第五章  重組蛋白分離純化     103
第一節(jié)  重組蛋白純化策略及設備    104
一、重組蛋白純化策略    104
二、重組蛋白純化設備    107
第二節(jié)  重組蛋白沉淀和膜分離技術    116
一、蛋白質沉淀法    117
二、膜分離技術    118
第三節(jié)  重組蛋白分離色譜技術    119
一、親和色譜法    120
二、疏水色譜法    122
三、凝膠過濾色譜法    124
四、離子交換色譜法    126
五、反相色譜法    129
參考文獻    131
第六章  重組蛋白藥物鑒定與分析     135
第一節(jié)  蛋白質理化特性    136
一、分子量測定    136
二、等電點與電荷異質性分析    141
三、肽圖分析    144
四、氨基酸組成分析    145
五、N端氨基酸測序    150
六、C端氨基酸測序    152
七、二硫鍵分析    153
八、高級結構分析    155
第二節(jié)  蛋白質含量分析    159
一、凱氏定氮法    159
二、Lowry法    161
三、BCA法    162
四、Bradford法    164
五、紫外吸收法    166
六、高效液相色譜法    166
第三節(jié)  蛋白質純度分析    168
一、宿主細胞蛋白殘留分析    168
二、宿主細胞DNA殘留分析    170
三、殘留抗生素檢測    172
四、其他成分檢測    173
第四節(jié)  糖基化修飾分析    181
一、分離富集親和技術    182
二、糖蛋白鑒定/糖基化位點的確定方法    187
三、糖鏈結構分析    189
第五節(jié)  生物學活性測定    206
一、體外法評估    207
二、體內法評估    211
第六節(jié)  免疫化學特性分析    213
一、親和力測定    213
二、抗原結合表位測定    217
參考文獻    219
第七章  重組蛋白藥物新技術      223
第一節(jié)  人工智能與蛋白藥物設計    224
一、核苷酸及蛋白質相關數(shù)據(jù)庫    224
二、基因信息分析及密碼子優(yōu)化    226
三、蛋白質信息分析及結構預測    241
四、人工智能設計    255
第二節(jié)  miRNA篩選與應用    269
一、miRNA篩選    269
二、miRNA應用    273
第三節(jié)  基因編輯技術    279
一、動物細胞CRISPR基因敲除    279
二、動物細胞基因敲入    289
第四節(jié)  表觀遺傳學技術    299
一、DNA甲基化分析    299
二、組蛋白修飾分析    305
三、非編碼RNA分析    314
第五節(jié)  DNA與蛋白質相互作用分析    323
一、凝膠遷移實驗    323
二、DNaseⅠ足跡實驗    330
三、酵母單雜交系統(tǒng)    337
四、染色質免疫沉淀    351
五、噬菌體展示技術（DNA與蛋白質相互作用）    354
參考文獻    356
附錄1  常用緩沖液及試劑的配制    363
附錄2  中英文詞匯表    369