生物化學實驗教程（第二版）

第一篇生物化學實驗基礎


第1章生物化學實驗的基本知識(3)


1.1實驗室規(guī)范(3)


1.2玻璃儀器(6)


1.3生物化學實驗常用儀器(11)

第2章生物化學實驗的基本要求(19)


2.1實驗樣品的制備(19)

2.2實驗的準確性與誤差(24)

2.3實驗記錄和實驗報告(26)

第3章生物化學基本實驗技術(28)


3.1層析技術(28)

3.2電泳技術(36)

3.3離心技術(42)

3.4膜分離技術(49)

3.5光譜學技術(53)

3.6其他生物化學實驗技術(62)


第二篇生物化學實驗

第4章蛋白質(73)

實驗1氨基酸和蛋白質的呈色反應(73)

實驗2蛋白質等電點的測定和沉淀反應(77)

實驗3血清蛋白鹽析及分子篩層析脫鹽(79)

實驗4蛋白質含量的測定(81)

Ⅰ雙縮脲法測定蛋白質含量(81)

Ⅱ考馬斯亮藍結合法(Bradford法)測定蛋白質含量(83)

Ⅲ紫外光吸收法測定蛋白質含量(85)

Ⅳ微量凱氏定氮法測定總蛋白含量(86)

ⅤFolin酚法測定蛋白質含量(88)

實驗5氨基酸的分離鑒定(90)

Ⅰ紙層析分離鑒定氨基酸(90)

Ⅱ離子交換層析分離混合氨基酸(91)

實驗6血清蛋白的醋酸纖維素薄膜電泳(93)

實驗7DNS氨基酸的制備和鑒定(95)

實驗8DNP氨基酸的制備和鑒定(98)

實驗9用DNS法鑒定蛋白質或多肽的N端氨基酸(100)

實驗10SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳分離細菌總蛋白質(102)

實驗11SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質的相對分子質量(104)

實驗12牛乳中蛋白質的提取與鑒定(108)

實驗13大豆蛋白的提取與含量測定(109)

實驗14葡聚糖凝膠層析法分離純化蛋白質(111)

第5章核酸(114)

實驗15核酸含量的測定(114)

Ⅰ定磷法定量測定核酸(114)

Ⅱ地衣酚法定量測定RNA(116)

Ⅲ二苯胺法測定DNA含量(117)


實驗16過碘酸氧化法定量測定核苷酸(118)

實驗17酵母核糖核酸的分離及組分鑒定(121)

實驗18菜花(花椰菜)中核酸的分離和鑒定(123)

實驗19動物肝臟中DNA的提取(125)

實驗20堿裂解法小量提取質粒DNA(127)

實驗21DNA瓊脂糖凝膠電泳(128)


實驗22AMP、ADP和ATP的分離(130)

Ⅰ薄層層析分離AMP、ADP和ATP(130)

Ⅱ醋酸纖維素薄膜電泳鑒定AMP、ADP、ATP(132)

第6章酶學(134)


實驗23酶的特性實驗(134)

實驗24米氏常數(shù)測定(135)

Ⅰ脲酶米氏常數(shù)的簡易測定(135)

Ⅱ過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定(137)

Ⅲ胰蛋白酶米氏常數(shù)的測定(139)

實驗25酶活力的測定(140)

Ⅰ液化型淀粉酶活力的測定(140)

Ⅱ薄層層析法鑒定轉氨酶活性(142)

Ⅲ分光光度法測定血液中轉氨酶的活力(143)

實驗26酶的制備(146)

Ⅰ乳酸脫氫酶粗提液的制備及活力測定(146)

Ⅱ枯草桿菌堿性磷酸酶的制備及酶活力的測定(147)

Ⅲ馬鈴薯多酚氧化酶的制備及性質實驗(150)

實驗27酶的固定化及對酶活性的影響(152)

實驗28琥珀酸脫氫酶競爭性抑制(154)

實驗29蔗糖酶相對分子質量的測定(SDSPAGE電泳法)(156)

第7章維生素和輔酶(159)

實驗30紫外分光光度法測定魚肝油中維生素A的含量(159)

實驗31食物中脂溶性維生素含量分析(高效液相色譜)(160)

實驗32維生素B1的定性測定(163)


實驗33維生素B1的含量測定(164)

實驗34熒光光度法測定維生素B2的含量(166)

實驗35測定維生素C的含量(167)

Ⅰ2，6二氯酚靛酚滴定法測定維生素C的含量(167)

Ⅱ銅離子氧化法測定維生素C的含量(169)

Ⅲ磷鉬酸法測定維生素C的含量(170)

實驗36輔酶Q10的制備和檢測(172)

實驗37分離層析儀分離核黃素和血紅蛋白(174)

第8章生物能學和物質代謝(177)

實驗38丙酮酸含量的測定(分光光度法)(177)

實驗39發(fā)酵過程中無機磷的利用(178)

實驗40肌糖原酵解作用(179)

實驗41糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定(181)

實驗42脂肪酸的β氧化(182)

實驗432,6二氯酚靛酚顯色反應測定電子傳遞(184)

實驗44乳酸脫氫酶的遞氫作用(186)

實驗45氨基移換反應(187)

第9章綜合性實驗(190)

實驗46糖的顏色反應(190)

ⅠMolisch反應鑒定醛糖(190)

ⅡSeliwanoff反應鑒定酮糖(191)

ⅢTollen反應鑒定戊糖(192)

實驗47血糖含量的測定(193)

ⅠFolinWu法測定血糖含量(193)

ⅡFolinMalmors法測定血糖含量(194)

Ⅲ鄰甲苯胺法測定血糖含量(196)

ⅣGODPAP法測定血糖含量(198)

實驗48總糖和還原糖含量的測定(199)

Ⅰ蒽酮比色法測定糖的含量(199)

Ⅱ斐林試劑比色法測定糖的含量(201)

Ⅲ3,5二硝基水楊酸比色法測定糖的含量(203)

實驗49脂類的測定(206)

Ⅰ索氏抽提法測定粗脂肪含量(206)

Ⅱ脂肪酸的測定(207)

Ⅲ血清甘油三酯簡易測定法(208)

Ⅳ醋酸酐法測定血清中膽固醇含量(210)

實驗50天然產(chǎn)物中多糖的分離、純化與鑒定(211)

Ⅰ多糖的提取、純化(211)

Ⅱ多糖的鑒定(212)

實驗51血清蛋白的分離、純化與鑒定(214)

實驗52凝膠層析法分離純化脲酶(217)

實驗53小麥萌發(fā)前、后淀粉酶活力的比較(220)

實驗54質粒DNA的分離、純化及鑒定(222)

實驗55多聚酶鏈式反應(PCR)技術擴增目的基因片段(225)

實驗56重組質粒DNA的轉化(227)

實驗57感受態(tài)細胞的制備及轉化(230)

實驗58DNA的酶切分析(231)

實驗59植物總黃酮的提取與測定(233)

實驗60蘆薈中活性成分的提取和純化(234)

Ⅰ蘆薈苷的提取和純化(234)

Ⅱ高速逆流色譜法分離蘆薈苷粗提物(236)

第10章設計性實驗(240)

實驗61半定量RTPCR檢測基因的表達差異(240)

實驗62卵磷脂的提取和鑒定(242)

實驗63強酸性陽離子交換樹脂在廢水處理中的應用(244)

實驗64轉基因植物的PCR鑒定(246)

實驗65卵黃高磷蛋白的提取(247)

附錄(251)

附錄A緩沖液的配制(251)

附錄B常用實驗數(shù)據(jù)表(256)

附錄C硫酸銨飽和度常用表(261)

附錄D層析技術實驗數(shù)據(jù)(262)

參考文獻(265)