聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)快速檢測腐爛蘋果中的擴展青霉（PCR）

第一章 蘋果汁中的擴展青霉污染及PCR技術(shù)應(yīng)用
第一節(jié) 我國蘋果及其加工生產(chǎn)狀況
一、蘋果特性及其營養(yǎng)價值
二、我國蘋果的生產(chǎn)現(xiàn)狀與發(fā)展前景
三、我國蘋果加工面臨的競爭與挑戰(zhàn)
第二節(jié) 棒曲霉毒素
一、理化性質(zhì)與危害
二、分析方法
第三節(jié) 擴展青霉
一、概述
二、檢測方法
第四節(jié) PCR技術(shù)應(yīng)用概述
一、PCR技術(shù)原理
二、PCR檢測技術(shù)的發(fā)展
三、PCR技術(shù)在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用
第五節(jié) 真菌DNA提取
第六節(jié) 克隆測序
一、感受態(tài)細(xì)胞的制備
二、藍(lán)白篩選的原理
三、電泳的原理
第七節(jié) 本研究的目的意義、內(nèi)容及技術(shù)路線
一、研究目的及意義
二、研究內(nèi)容
三、研究的技術(shù)路線
第二章 擴展青霉基因組DNA的提取
第一節(jié) 材料與方法
一、試驗菌株與培養(yǎng)基
二、主要試劑
三、主要儀器
四、菌體培養(yǎng)與收集
五、DNA提取方法
六、DNA檢測方法
七、PCR擴增方法
八、凝膠電泳檢測方法
第二節(jié) 結(jié)果與分析
一、培養(yǎng)方式的選擇
二、五種提取擴展青霉基因組DNA方法的比較
三、五種提取方法所提DNA結(jié)果的比較
四、電泳檢測所提DNA的結(jié)果
五、PCR擴增結(jié)果
第三節(jié) 結(jié)論與討論
第三章 腐爛蘋果中的真菌分離與鑒定
第一節(jié) 材料與方法
一、材料與試劑
二、儀器與設(shè)備
三、方法與步驟
第二節(jié) 結(jié)果與分析
一、棒曲霉素產(chǎn)生菌的主要種類
二、不同產(chǎn)地腐爛蘋果中棒曲霉素產(chǎn)生菌的差異
第三節(jié) 結(jié)論與討論
第四章 基于氯化芐法提取DNA的PCR檢測擴展青霉方法優(yōu)化
第一節(jié) 材料與儀器
一、主要原材料
二、主要試劑
三、主要儀器設(shè)備
第二節(jié) 方法與步驟
一、引物選擇
二、退火溫度的優(yōu)化
三、引物濃度的選擇
四、模板濃度的選擇
第三節(jié) 結(jié)果與分析
一、引物的選擇
二、退火溫度
三、引物濃度優(yōu)化結(jié)果
四、模板濃度
五、特異性
六、靈敏性檢測結(jié)果
第四節(jié) 結(jié)論與討論
第五章 PCR擴增產(chǎn)物的克隆測序
第一節(jié) 材料與儀器
一、主要試劑
二、主要儀器設(shè)備
第二節(jié) 方法與步驟
一、感受態(tài)細(xì)胞的制備
二、PCR擴增產(chǎn)物回收純化
三、克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
四、轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
五、質(zhì)粒DNA制備
六、質(zhì)粒的雙酶切鑒定
七、測序
第三節(jié) 結(jié)果與分析
一、轉(zhuǎn)化結(jié)果
二、陽性克隆鑒定結(jié)果
三、測序與Blast結(jié)果
第四節(jié) 結(jié)論與討論
第六章 擴展青霉3.3703基因組DNA快速提取
第一節(jié) 材料與方法
一、材料與試劑
二、儀器與設(shè)備
三、方法與步驟
四、提取DNA的純度及濃度檢測
五、PCR擴增
六、凝膠電泳檢測
第二節(jié) 結(jié)果與分析
一、四種方法提取DNA純度及濃度檢測結(jié)果
二、四種方法提取總DNA樣品檢測結(jié)果
三、PCR擴增檢測結(jié)果
第三節(jié) 結(jié)論與討論
第七章 PCR特異性擴增擴展青霉3.3703和擴展青霉3.5425
第一節(jié) 材料與方法
一、材料與試劑
二、儀器與設(shè)備
三、方法與步驟
第二節(jié) 結(jié)果與分析
一、PCR擴增引物篩選結(jié)果
二、PCR引物特異性試驗結(jié)果
三、PCR敏感性試驗結(jié)果
第三節(jié) 結(jié)論與討論
第八章 擴展青霉3.5425實時PCR快速檢測條件優(yōu)化
第一節(jié) 材料與方法
一、材料與試劑
二、儀器與設(shè)備
三、方法與步驟
第二節(jié) 結(jié)果與分析
一、退火溫度對擴展青霉3.5425實時PCR結(jié)果的影響
二、引物濃度對擴展青霉3.5425實時PCR檢測的影響
三、實時 PCR靈敏度檢驗
第三節(jié) 結(jié)論與討論
第九章 PCR快速檢測不同來源擴展青霉菌的條件優(yōu)化
第一節(jié) 材料與方法
一、材料與試劑
二、主要儀器與設(shè)備
三、試驗方法與步驟
四、試驗真菌培養(yǎng)基
第二節(jié) 結(jié)果與分析
一、PCR退火溫度優(yōu)化結(jié)果
二、最適引物濃度的篩選
三、最適模板濃度的篩選
四、最適底物濃度的選擇
五、優(yōu)化參數(shù)條件下的PCR檢測
六、人工感染六品的PCR檢測
第三節(jié) 結(jié)論與討論
參考文獻(xiàn)