醫(yī)學生物化學實驗指導

第一篇 實驗理論
第一章 吸收光譜法
第一節(jié) 光譜分析基礎知識
一、光的基本性質
二、吸收光譜
三、物質顏色與光吸收
第二節(jié) 光吸收的基本定律
一、吸光度與透光率
二、吸收光譜分析的基本定律
三、吸光系數(shù)
四、偏離Beer定律的因素
第三節(jié) 吸收光譜法的應用
一、定性分析
二、定量分析
三、吸收光譜分析的條件控制
第四節(jié) 分光光度計的基本結構和使用
一、分光光度計的基本結構
二、分光光度計的使用與要求
第二章 電泳技術
第一節(jié) 電泳的基本原理和分類
一、電泳的基本原理
二、電泳的遷移率
三、電泳的分類
第二節(jié) 電泳的影響因素
一、樣品的性質
二、電場強度
三、緩沖液的性質
四、支持介質
第三節(jié) 區(qū)帶電泳
一、醋酸纖維薄膜電泳
二、瓊脂糖凝膠電泳
三、聚丙烯酰胺凝膠電泳
第四節(jié) 特殊的電泳
一、等電聚焦電泳
二、雙向電泳
第五節(jié) 電泳后的染色
一、蛋白質的染色
二、核酸的染色
第三章 層析法
第一節(jié) 層析法的原理與分類
一、層析法的基本原理
二、層析法的分類
三、柱層析的基本組成
第二節(jié) 常用的層析法
一、薄層吸附層析
二、分配層析
三、離子交換層析
四、凝膠層析
五、親和層析
六、高效液相層析
第四章 酶學分析
第一節(jié) 酶的分離純化及鑒定
一、酶的分離純化
二、酶制劑的鑒定
第二節(jié) 酶活性測定
一、酶活性測定方法
二、酶的活性單位
第三節(jié) 酶促反應動力學研究
一、底物濃度對酶促反應速度的影響
二、溫度對酶促反應速度的影響
三、pH值對酶促反應速度的影響
四、激活劑、抑制劑對酶促反應速度的影響
五、酶促反應樣品及參比溶液的設定
第四節(jié) 酶法分析
一、單酶反應定量法
二、耦聯(lián)酶反應定量法
第五節(jié) 同工酶分析
第六節(jié) 酶在生物醫(yī)學上的應用
一、酶在疾病診斷中的應用
二、酶在疾病治療中應用
第五章 蛋白質的分離與純化
第一節(jié) 蛋白質分離純化的原理和基本方法
一、沉淀法
二、透析與超濾
三、超速離心
四、層析
五、電泳
第二節(jié) 選擇蛋白質分離純化方法的策略
第三節(jié) 蛋白質的制備
一、材料的選擇與預處理
二、細胞的破碎
三、提取
四、分級分離步驟
五、結晶
第四節(jié) 蛋白質的濃縮、干燥和保存
一、濃縮
二、干燥
三、樣品的保存
第六章 核酸的分離純化與鑒定分析
第一節(jié) 核酸分離純化
一、核酸分離純化的原則及要求
二、核酸提取的主要步驟
三、核酸的濃縮、沉淀與洗滌
第二節(jié) 核酸的鑒定與分析
一、紫外分光光度法的定量、定性分析
二、核酸凝膠電泳
三、聚合酶鏈反應（PCR）技術
第二篇 實驗篇
第七章 基礎性實驗
實驗一 蛋白質含量的測定
一、酚試劑法
二、BCA法
三、雙縮脲法
四、紫外吸收法
實驗二 核酸含量的測定
一、二苯胺法測定DNA含量
二、地衣酚法測定RNA含量
三、紫外分光光度法分析核酸的純度及濃度
實驗三 腎上腺素與胰島素對血糖濃度的影響——鄰甲苯胺法測定
實驗四 血清蛋白質醋酸纖維薄膜電泳
實驗五 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳
實驗六 SDS—PAGE測定蛋白質分子量
實驗七 氨基酸的紙層析
實驗八 離子交換層析分離混合氨基酸
實驗九 凝膠層析分離血紅蛋白與魚精蛋白
實驗十 血清谷丙轉氨酶酶活性測定（改良Mohun法）
實驗十一 底物濃度對酶活性的影響——堿性磷酸酶Km值的測定
實驗十二 溫度和pH值對酶活性的影響
實驗十三 丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制
第八章 綜合性實驗
實驗十四 常見血液生化指標的酶終點法分析
一、酶法測定血清甘油三酯
二、酶法測血清膽固醇
三、磷鎢酸—鎂沉淀法（PTA—Mg2+法）測定血清HDL—C含量
四、酶法測定血液葡萄糖
實驗十五 乳酸脫氫酶（LDH）的分析
一、血清乳酸脫氫酶（LDH）總活性測定
二、血清乳酸脫氫酶同工酶分離——瓊脂糖凝膠電泳法
實驗十六 血清免疫球蛋白IgG的分離純化與鑒定
一、IgG的分離與純化
二、IgG制品鑒定法
實驗十七 谷胱甘肽巰基轉移酶融合蛋白的表達及純化
一、細菌轉化、培養(yǎng)和GST融合蛋白的誘導表達
二、Western blotting檢測GST融合蛋白表達
三、親和層析純化GST融合蛋白
四、SDS—PAGE鑒定GST融合蛋白的純度
實驗十八 外周血白細胞基因組DNA的分離純化、鑒定與分析
一、外周血白細胞DNA的提取（Nal法）
二、紫外分光光度法分析DNA的純度及濃度
三、DNA的瓊脂糖凝膠電泳
四、聚合酶鏈反應（PCR）
實驗十九 小鼠肝組織細胞RNA的分離純化、鑒定與分析
一、TRIzol法提取RNA
二、紫外分光光度法分析RNA的純度及濃度
三、RNA的甲醛變性凝膠電泳
四、逆轉錄PCR（RT—PCR）
實驗二十 質粒DNA的提取、酶切和電泳分析
一、SDS—堿裂解法小量制備質粒DNA
二、質粒DNA限制性內(nèi)切酶酶切分析
三、質粒DNA酶切產(chǎn)物的非變性PAGE分析
第九章 研究設計性實驗
實驗二十一 堿性磷酸酶的分離純化、鑒定及酶動力學實驗
實驗二十二 載脂蛋白AI的原核表達、分離純化及鑒定分析
附錄
附錄一 生物化學實驗須知
附錄二 實驗室基本操作
附錄三 試劑分級及常用酸堿溶液
附錄四 常用緩沖液和試劑的配制
參考文獻