噬菌體展示：通用實驗指南

第l章 噬菌體生物學(xué)及噬菌體展示簡介
　1.1　簡介
　1.2　絲狀噬菌體生物學(xué)
　1.2.1　簡介
　1.2.2　噬菌體顆粒的結(jié)構(gòu)
　1.2.3　感染
　1.2.4　復(fù)制
　 1.2.5　基因和基因表達(dá)
　 1.2.6 噬菌體裝配生理學(xué)
　 1.2.7 噬菌體裝配機制
　1.3　噬菌體展示所使用的衣殼蛋白
　1.3.1　pⅧ蛋白
　1.3.2　pⅢ蛋白
　1.4　著手一個噬菌體展示項目
　1.4.1　展示的可行性
　1.4.2 筮菌體載體還是噬菌粒載體？
　1.4.3　多價展示還是單價展示？
　 1.4.4　輔助噬菌體
　1.4.5 籃菌體制備及定量的一般實驗方案
　1.5　一個噬菌體展示項目的一般規(guī)則
　1.5.1　一個文庫的生成
　 1.5.2　篩選
　 1.5.3　克隆的分析
　1.6　常見的問題
　 1.6.1　文庫的質(zhì)量
　 1.6.2　表達(dá)的編輯
　 1.6.3　過度篩選
　1.7　作為替代的展示系統(tǒng)
　1.8 筮菌體展示文庫及試劑盒的商業(yè)來源
　參考文獻(xiàn)
第2章　使用寡核苷酸定向誘變構(gòu)建噬茵體展示文庫
2.1　簡介
2.2　文庫設(shè)計的考慮
2.2.1　點突變
　 2.2.2　簡并密碼子的設(shè)計
　 2.2.3　理論的和實際的多樣性
　2.3　定點誘變
　 2.3.1　定點誘變與盒式誘變的比較
　 2.3.2　寡核苷酸定向誘變的化學(xué)和生物學(xué)
　 2.3.3　無活性模板的構(gòu)建
　2.4　文庫的構(gòu)建和保存
　 2.4.1　單鏈DNA模板的制備
　 2.4.2　異源雙鏈CCC—dsDNA的體外合成
　 2.4.3　大腸桿菌的電轉(zhuǎn)化和文庫噬菌體的制備
　 2.4.4　文庫的保存和再感染
　2.5　生物試劑
　參考文獻(xiàn)
第3章　體外DNA重組
3.1　導(dǎo)言
3.2　體外DNA重組的本底
3.2.1　體外DNA重組在定向進(jìn)化中的使用
3.2.2　體外DNA重組的應(yīng)用
3.2.3　重組統(tǒng)計學(xué)
3.3　體外DNA重組的方法
3.3.1　Stemmer法
3.3.2 來自大腸桿菌的內(nèi)切核酸酶V的DNA的隨機片段化
3.3.3　隨機引物重組
3.3.4　交錯延伸程序
3.3.5　體外異源雙鏈的形成和體內(nèi)修復(fù)（異源雙鏈重組）
3.3.6　重組方法的選擇
3.3.7　本底的消除
3.3.8　技術(shù)要點
參考文獻(xiàn)
第4章 為提高蛋白及多肽的親和性及特異性的噬菌體篩選策略
4.1　簡介
4.2　載體的考慮
4.2.1　單價和多價噬菌體展示
4.2.2　確保展示的成功
4.2.3　通過噬菌粒載體的蛋白質(zhì)表達(dá)
4.2.4　載體的構(gòu)建及噬菌粒的制備
4.3　文庫的設(shè)計
4.3.1　硬隨機突變
4.3.2　軟隨機突變
4.4　靶標(biāo)的呈遞
　　……　　
第5章　用噬菌體ELISA快速鑒定噬菌體展示蛋白的結(jié)合親和性
第6章　使用重組肽庫為受體識別新配體
第7章　底物噬菌體展示
第8章　從噬菌體展示文庫中對穩(wěn)定折疊的蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域進(jìn)行的基于蛋白酶的篩選
第9章　鋅指結(jié)構(gòu)與其他核酸結(jié)合性基序的噬菌體展示
第10章　噬菌體展示文庫在體內(nèi)及體外的篩選
第11章　利用血清篩選噬菌體文庫
第12章　使用展示在噬菌體上的cDNA文庫進(jìn)行相互作用克隆
第13章　噬菌體抗體文庫
第14章　噬菌體抗體的親和力成熟
附錄　普通供應(yīng)商