基因工程實驗指導(dǎo)

實驗計劃表
導(dǎo)論
1 基因文庫的構(gòu)建
l—l 染色體DNA的提取
1—2 總RNA和mRNA的提取
1—3 噬菌體DNA的提取
l一4 染色體DNA的部分消化
1—5 基因組文庫的構(gòu)建
1—6 cDNA合成
1—7 cDNA文庫的構(gòu)建
2 目的基因的獲得
2—1 PCR擴增及RT—PCR
2—2 核酸電泳
2—3 核酸探針的標(biāo)記及檢測
2—4 核酸探針篩選基因文庫
3 載體質(zhì)粒的制備
3—1 質(zhì)粒DNA的提取與純化
3—2 核酸純度、濃度與相對分子質(zhì)量的測定
4 擴增質(zhì)粒的構(gòu)建
4—1 限制性內(nèi)切酶的酶切反應(yīng)
4—2 凝膠電泳法進行DNA的分離、提純
4—3 DNA片段的體外連接
5 重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞
5—1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
5—2 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
6 重組子的篩選與鑒定
6—1 陽性克隆的篩選
6—2 測序與序列同源性分析
6—3 Southern印跡
7 表達質(zhì)粒的構(gòu)建與誘導(dǎo)表達
7—1 表達質(zhì)粒的構(gòu)建
7—2 Northern印跡
7—3 外源基因的誘導(dǎo)表達
7—4 SDS—PAGE
7—5 Western印跡
7—6 酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)
7—7 蛋白質(zhì)生物功能測定法
8 工程菌的培養(yǎng)與目標(biāo)產(chǎn)物分離
8—1 發(fā)酵條件的優(yōu)化
8—2 誘導(dǎo)表達蛋白質(zhì)的分離沉淀
8—3 凝膠過濾層析
8—4 離子交換層析
8—5 蛋白質(zhì)濃度的測定
8—6 酶活性的測定
8—7 分離純化蛋白的收率計算與保存
參考文獻
附錄1 簡寫
附錄2 實驗注意事項
附錄3 如何撰寫實驗報告
附錄4 常用的堿基、氨基酸符號及緩沖液
附錄5 大腸桿菌基因型
附錄6 培養(yǎng)基與試劑的配制
附錄7 實驗儀器