基因打靶技術(shù)

1 基因打靶技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史及其應(yīng)用前景
1.1 基因打靶技術(shù)的概念
1.2 胚胎干細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展
1.3 同源重組技術(shù)的發(fā)展
1.4 基因打靶技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用前景
2 基因打靶的策略及載體設(shè)計(jì)
2.1 完全基因剔除
2.2 基于CRE-LOXP重組酶系統(tǒng)的條件基因打靶技術(shù)
2.3 用基因打靶技術(shù)引入精細(xì)突變
2.4 大片段染色體的重排和刪除
2.5 隨機(jī)基因剔除-基因誘捕
2.6 ENU誘導(dǎo)點(diǎn)突變與大規(guī)模基因突變和功能研究
2.7 利用基因敲入技術(shù)制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物
3 中靶胚胎干細(xì)胞的篩選
3.1 胚胎干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
3.2 打靶載體轉(zhuǎn)染ES細(xì)胞
3.3 ES細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化研究
4 由中靶細(xì)胞突得突變體動(dòng)物的方法
4.1 通過(guò)囊胚顯微注射法獲得嵌合體小鼠
4.2 通過(guò)胚胎聚合法獲得完全ES細(xì)胞來(lái)源的胚胎或嵌合體小鼠
5 基因打靶在現(xiàn)代生物學(xué)研究中的應(yīng)用實(shí)例
5.1 應(yīng)用基因剔除技術(shù)研究SMADS基因的功能
5.2 葡萄糖激酶基因剔除及成年型糖尿病模型
5.3 人類疾病的基因打靶小鼠模型
5.4 核移植法研制突變體動(dòng)物
6 基因打靶技術(shù)存在的問(wèn)題及對(duì)策
6.1 打靶載體設(shè)計(jì)引起的問(wèn)題
6.2 表型解釋中存在的問(wèn)題
6.3 關(guān)于解決基因打靶研究中粗乃的問(wèn)題的建議
6.4 總結(jié)
7 附錄1 常用實(shí)驗(yàn)方法
7.1 靶基因CDNA探針的克隆
7.2 靶基因基因組DNA片段的篩選和克隆
7.3 NORTHERN雜交分析
7.4 小鼠的基因型分析
7.5 常規(guī)組織學(xué)分析
7.6 免疫組化分析
7.7 普通原位雜交
7.8 整體原位雜交
7.9 小鼠的全骨架制備
7.1 利用藏紅O染色檢測(cè)小鼠骨切片中蛋白多糖的含量
7.11 小鼠組織的LAC Z染色
8 附錄2 常用溶液和緩沖液的配制
8.1 常用試劑的配制
8.2 雜交試驗(yàn)中用于降低背景的封閉液
8.3 蛋白水解酶類
8.4 M2和M16溶液的配制
9 附錄3 常用參考書(shū)和數(shù)據(jù)庫(kù)
9.1 常用參考書(shū)
9.2 常用基因打靶和轉(zhuǎn)基因小鼠資源網(wǎng)站
后記