基因表達(dá)技術(shù)

叢書(shū)序Ⅰ
叢書(shū)序Ⅱ
前言
第一章大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)
一、表達(dá)載體的構(gòu)成
(一)復(fù)制子
(二)篩選標(biāo)記
(三)啟動(dòng)子和終止子
(四)核糖體結(jié)合位點(diǎn)
二、各種類型表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)成及特點(diǎn)
(一)Lac和Tac表達(dá)系統(tǒng)
(二)PL和PR表達(dá)系統(tǒng)
(三)T7表達(dá)系統(tǒng)
(四)其他表達(dá)系統(tǒng)
三、目標(biāo)蛋白表達(dá)的形式和在細(xì)胞中的位置
四、高效表達(dá)目標(biāo)基因的戰(zhàn)略和技術(shù)
(一)表達(dá)質(zhì)粒的優(yōu)化設(shè)計(jì)
(二)共表達(dá)大腸桿菌稀有密碼子tRNA基因
(三)提高目標(biāo)基因mRNA和目標(biāo)基因產(chǎn)物的穩(wěn)定性
(四)高密度發(fā)酵和工程化宿主細(xì)胞
五、大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)研究的發(fā)展趨勢(shì)
第二章芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)
一、發(fā)展簡(jiǎn)史
二、表達(dá)概述
(一)特點(diǎn)
(二)宿主菌株
(三)載體
三、基因表達(dá)
(一)基因表達(dá)的特點(diǎn)
(二)已表達(dá)的克隆基因
(三)蛋白質(zhì)工程
四、存在問(wèn)題及今后發(fā)展方向
(一)關(guān)于表達(dá)真核基因方面
(二)關(guān)于表達(dá)酶的方面
(三)關(guān)于表達(dá)殺蟲(chóng)菌晶體蛋白(ICP)方面
(四)關(guān)于致病菌炭疽芽孢桿菌方面
(五)利用芽孢桿菌基因工程技術(shù)擴(kuò)大和加強(qiáng)芽孢桿菌在各方面的應(yīng)用
第三章鏈霉菌基因表達(dá)系統(tǒng)
一、鏈霉菌的生物學(xué)特征
二、鏈霉菌基因克隆系統(tǒng)
(一)鏈霉菌的載體
(二)鏈霉菌的基因轉(zhuǎn)移的方法
三、鏈霉菌基因的調(diào)控和蛋白質(zhì)的分泌表達(dá)
(一)RNA聚合酶基因多樣性
(二)調(diào)節(jié)基因
(三)調(diào)節(jié)因子
(四)鏈霉菌基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
(五)鏈霉菌中的蛋白外泌系統(tǒng)
四、外源基因在鏈霉菌中的表達(dá)
(一)同種異源基因的表達(dá)
(二)異種外源基因的表達(dá)
五、影響鏈霉菌中基因表達(dá)的因素
(一)啟動(dòng)子對(duì)外源基因表達(dá)的影響
(二)信號(hào)肽對(duì)外源蛋白分泌的影響
(三)密碼子、SD序列和終止子等對(duì)基因表達(dá)的影響
(四)DNA壙增序列對(duì)基因表達(dá)的影響
(五)發(fā)酵條件對(duì)外源基因表達(dá)的影響
六、鏈霉菌基因表達(dá)翻譯的后修飾
(一)對(duì)外源蛋白的糖基化
(二)對(duì)外源蛋白的降解
七、鏈霉菌作為表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)及研究發(fā)展趨勢(shì)
第四章 原核生物增強(qiáng)子樣系列
一、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的兩類基本元件
(一)啟動(dòng)子元件
(二)增強(qiáng)子元件
二、原核基因表達(dá)調(diào)節(jié)的一些見(jiàn)解
三、來(lái)源于動(dòng)物病毒基因序列和大腸桿菌染色體的大腸桿菌增強(qiáng)子
(V??EE和E??EE)
四、λPL和trp啟動(dòng)子上游AT豐富區(qū)的增強(qiáng)子樣效應(yīng)
五、hylR增強(qiáng)子
六、固氮基因的原核增強(qiáng)子
七、T4噬蓖體晚期基因轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子
八、原核增強(qiáng)子樣序列的應(yīng)用
第五章酵母表達(dá)系統(tǒng)
一、酵母基因表達(dá)系統(tǒng)的概況
(一)酵母載體的基本結(jié)構(gòu)
(二)酵母表達(dá)系統(tǒng)中載體的種類
(三)酵母菌基因表達(dá)系統(tǒng)的宿主
(四)酵母的DNA轉(zhuǎn)化
二、酵母表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展
(一)外源基因在酵母中的高表達(dá)
(二)提高外源基因表達(dá)產(chǎn)物的質(zhì)量
(三)酵母表達(dá)系統(tǒng)的新應(yīng)用
三、結(jié)束語(yǔ)
第六章絲狀真菌基因工程
一、載體和轉(zhuǎn)化方法
(一)載體
(二)轉(zhuǎn)化方法
(三)提高轉(zhuǎn)化頻率的方法
(四)轉(zhuǎn)化DNA的歸宿
二、基因的結(jié)構(gòu)和功能
(一)轉(zhuǎn)錄
(二)翻譯起始和終止
(三)基因的染色體排列和定位
(四)基因的染色體排列和定位
(五)基因表達(dá)的調(diào)控
三、次級(jí)代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)
(一)β-內(nèi)酰胺抗生素
(二)多肽代謝物
四、外源蛋白在真菌中的表達(dá)
(一)工業(yè)用酶
(二)醫(yī)療用蛋白酶
五、展望
第七章昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)
一、歷史回顧
二、最新進(jìn)展
(一)重組病毒獲得的技術(shù)途徑及載移載體的發(fā)展
(二)病毒載體的虱進(jìn)
(三)昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)
(四)自主式昆蟲(chóng)宿主反應(yīng)器
(五)桿狀病毒在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能上的研究
(六)昆蟲(chóng)病毒表達(dá)系統(tǒng)用于多肽藥物和疫苗研制
三、今后方向
第八章哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
一、概述
二、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
(一)宿主細(xì)胞
(二)表達(dá)載體的構(gòu)建和常用的細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
(三)主表達(dá)細(xì)胞株的基因共壙增和篩選方法
三、展望
(一)改進(jìn)表達(dá)載體，提高表達(dá)水平和產(chǎn)量
(二)利用代謝工程，改進(jìn)培養(yǎng)工藝，降低生產(chǎn)成本
(三)抑制細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)培養(yǎng)周期
(四)采用“糖基化”工程，提高產(chǎn)品質(zhì)量
第九章轉(zhuǎn)基因動(dòng)物與基因表達(dá)
一、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物概述
(一)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物發(fā)展簡(jiǎn)史
(二)什么是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物
(三)有關(guān)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的倫理學(xué)問(wèn)題
二、轉(zhuǎn)基因方法
(一)顯微注射
(二)通過(guò)動(dòng)物體細(xì)胞克隆生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物
(三)其他轉(zhuǎn)基因方法
三、基因整合
(一)隨機(jī)整合
(二)同源重組
四、動(dòng)物基因表達(dá)的基礎(chǔ)知識(shí)
(一)組織特異性表達(dá)
(二)染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)
(三)真核基因的表達(dá)過(guò)程
五、外源基因的表達(dá)
(一)真核基因表達(dá)的調(diào)控序列
(二)表達(dá)結(jié)構(gòu)的構(gòu)建和功能域轉(zhuǎn)移
六、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在生物工程產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用前景
(一)提高家畜的生長(zhǎng)速度和飼料轉(zhuǎn)化效率
(二)生產(chǎn)藥用蛋白質(zhì)
(三)人工改良牛奶
(四)器官供應(yīng)來(lái)源
第十章植物生長(zhǎng)反應(yīng)器
一、引言
二、基本原理、方法
(一)轉(zhuǎn)化方法
(二)轉(zhuǎn)基因的構(gòu)建
三、進(jìn)展、問(wèn)題與對(duì)策
(一)國(guó)內(nèi)外研究、應(yīng)用用展
(二)問(wèn)題與對(duì)策
四、總結(jié)
第十一章基因治療中的基因表達(dá)問(wèn)題
一、基因治療概況
(一)基因治療的概念和適應(yīng)癥
(二)基因治療的策略
(三)臨床項(xiàng)目的現(xiàn)狀與評(píng)價(jià)
二、基因治療載體系統(tǒng)的種類和特點(diǎn)
(一)病毒載體
(二)非病毒載體
(三)基因?qū)塍w內(nèi)新途徑
三、靶向性問(wèn)題
(一)靶向?qū)胄洼d體
(二)靶向性表達(dá)
四、基因表達(dá)調(diào)控問(wèn)題
(一)可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)
(二)特異反應(yīng)性啟動(dòng)子誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)
(三)調(diào)控序列對(duì)基因表達(dá)的影響
(四)目的基因體內(nèi)長(zhǎng)期表達(dá)的問(wèn)題
五、小結(jié)與展望
第十二章基因表達(dá)與發(fā)酵
一、基因重組菌的穩(wěn)定性
(一)培養(yǎng)過(guò)程中重組菌穩(wěn)定性對(duì)群體組成變化的影響
(二)培養(yǎng)條件對(duì)穩(wěn)定性的影響
二、影響外源基因表達(dá)的因素
(一)培養(yǎng)基
(二)比生長(zhǎng)速率
(三)溶氧
(四)溫度
(五)外源基因表達(dá)的誘導(dǎo)強(qiáng)度
(六)代謝副產(chǎn)物的影響
(七)重組菌的穩(wěn)定性
三、發(fā)酵過(guò)程的優(yōu)化和控制
(一)高密度培養(yǎng)
(二)代謝副產(chǎn)物生成的防止
(三)發(fā)酵過(guò)程的控制
(四)培養(yǎng)的操作方式
(五)展望
第十三章基因表達(dá)技術(shù)中的序列數(shù)據(jù)分析方法
一、前言
二、序列數(shù)據(jù)分析方法的概述
(一)基因工程實(shí)驗(yàn)中的模擬
(二)PCR的計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)方法
(三)序列比較方法
(四)外源基因表達(dá)水平的分析
(五)蛋白質(zhì)性質(zhì)的分析